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●  貨品內容：

● 運輸、貯存及效期：

本產品常溫運輸；4-8℃貯存，其中配制后的改良型促凝劑貯存于-20℃；有效期一年。

● 產品特點：

快速制備凝膠：無需液封等待下層膠凝固，即可直接灌注上層膠，制膠更省時；

彩色上層膠：可制備五種顏色的上層膠，為點樣和區分不同凝膠提供便利；

避免異味：無需使用 TEMED，環境安全友好；

凝膠高穩定性：中性pH凝膠,有效提高凝膠穩定性,密封條件下，凝膠可以四度貯存6個月。

兼容性廣：制膠溶液中不含SDS，可用于非變性電泳（Native-PAGE）。

● 產品簡介：

該產品利用聚丙烯酰胺凝膠電泳原理，采用上層膠和下層膠的預混配方，只需加入改良型促凝劑即可凝膠，灌入下層膠后，無需等待凝膠，直接灌入上層膠即可，簡便快捷可在15分鐘內配制得到高質量的聚丙烯酰胺凝膠，可用于變性和非變性蛋白凝膠電泳，適用于Tris-甘氨酸電泳體系（Laemmli體系）。五種上層膠顏色設計，點樣孔清晰易辨，方便點樣，可以配制6%（黃色上層膠）、7.5%（綠色上層膠）、10%（藍色上層膠）、12.5%（紅色上層膠）和15%（紫色上層膠）的分離膠濃度，可以滿足絕大多數蛋白電泳需求。

本產品配套提供改良型促凝劑 ，其具有更好的穩定性和催化效能，配膠過程中無需額外添加TEMED。為方便操作，已開蓋使用中的改良型促凝劑，可置于 4℃保存至少三個月。

本試劑盒大約可以配制60-125塊常規大小（8×10 cm）的PAGE凝膠，具體數量根據凝膠厚度決定：0.75 mm厚度凝膠可以配制125塊膠，1.0 mm厚度凝膠可以配制至少90塊膠，1.5 mm厚度凝膠可以配制至少60塊膠。

● 使用說明：

一. 制膠前的準備：

1.1     即用型改良型促凝劑配制：

試劑盒提供的改良型促凝劑為干粉，第一次使用前加入10 ml超純水，徹底溶解后使用。配制好的即用型改良型促凝劑置于4℃備用，長期不用建議-20℃貯存。

1.2     推薦操作：

實驗前半小時，取出試劑盒所有組份，常溫靜置半小時使溶液恢復到常溫后輕柔混勻后使用，可以有效降低制膠時產生氣泡的可能性。

二. 凝膠配制(以一塊0.75/1.0/1.5 mm厚度的8×10cm膠為例)：

2.1取等體積彩色上層膠緩沖液和上層膠溶液，各0.5/0.75/1.0 ml，混勻；

注：由于染料的特殊理化性質，彩色上層膠緩沖液使用前請搖勻。

2.2取等體積下層膠緩沖液和下層膠溶液，各2.0/2.5/4.0 ml，混勻；

2.3 向步驟2.1的上層膠混合溶液中加入10/15/20 μl改良型促凝劑，輕輕混勻。

注：加入改良型促凝劑后，需輕柔混勻，防止過多氧氣混入膠溶液，抑制凝膠聚合和導致凝膠內可能產生氣泡。

2.4 向步驟2.2的下層膠混合溶液中加入40/50/80 μl改良型促凝劑，輕輕混勻；將溶液注入制膠玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之間的距離為約1.5 cm或距離梳齒下沿距離為約0.5 cm即可；

注：此溶液為過量，請勿全部注入，可留少許于制膠杯中，便于判斷凝膠狀態；加入改良型促凝劑后，需輕柔混勻，防止過多氧氣混入膠溶液，抑制凝膠聚合和導致凝膠內可能產生氣泡。

2.5 無需等待下層膠凝固，迅速將步驟2.3的上層膠混合溶液左右平移緩慢輕柔注入制膠玻璃板中，插入梳齒。

注：加入下層膠混合液后，請在1-2分鐘內灌注上層膠混合溶液，加入時一定要輕緩，避免將上層膠溶液沖入下層膠；凝固后上下層膠分界線平整度略弱于使用封閉方法配制的凝膠，但對后續電泳沒有影響。

2.6 待膠凝固后拔去梳齒，用注射器或槍頭吸取電泳緩沖液將加樣孔沖洗干凈，即可進行常規電泳操作。

注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快；冬天氣溫低時，聚合時間會延長。

溫度與凝膠時間參考表

附：凝膠配方表

三. 電泳：

3.1 變性電泳：

3.2 非變性電泳：

非變性電泳必看：該凝膠體系pH大約8左右，適用于等電點pI小于8的蛋白電泳分離，pI越遠離8，帶的負電荷越多，分離就更容易；等電點接近8或者高于8的蛋白不適合用該系統進行非變性電泳。

四. 凝膠染色或轉膜：

4.1 凝膠染色可以選擇FastBlue蛋白快速染色液(貨號：RTD6202)， 可以在30分鐘內完成染色和脫色，也可以選擇常規法考馬斯亮藍蛋白染色液（貨號：RTD6203）。

4.2 轉膜緩沖液可以使用濕轉法或半干轉方法轉膜。濕轉法可以使用經典Tris-甘氨酸轉膜緩沖液（貨號：TB1040）或者使用10×RealBlot快速轉膜液（貨號：RT5020）。半干轉轉膜可以使用5×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液（貨號：RT5030）。

五. 凝膠濃度選擇參考：